Тема 3 Микроскопические методы исследования

Различные методы микроскопии

Кроме светооптической микроскопии к методам микроскопии относят: темнопольную, фазово-контрастную, люминесцентную и электронную микроскопии.

4.3.4.1 Темнопольная микроскопия

Метод наблюдения в темном поле, разработанный австрийским ученым Зигмонди, дает возможность повысить разрешающую способность микроскопа в 10 раз. В основе метода лежит явление Тиндаля – освещение объекта косыми лучами света. Эти лучи, не попадая в объектив, остаются невидимыми для глаза, поэтому поле зрения выглядит темным. В то же время оптически неоднородные клетки, находящиеся в поле зрения и попадающие в сферу прохождения лучей, отклоняют их в такой степени, что лучи попадают в объектив. Тогда наблюдатель видит в темном поле интенсивно светящиеся объекты, поскольку лучи света идут именно от них.

Темное поле зрения можно создать в светооптическом микроскопе, заменив обычный конденсор темнопольным и применив для освещения источник сильного света. Однако эффект темного поля может быть достигнут только в том случае, если апертура конденсора превышает на 0,2…0,4 единицы апертуру объектива. Для исследования в темном поле рекомендуется конденсор с апертурой около 1,2 и объективы с апертурой от 0,65 до 0,85.

Метод используется с целью исследования живых клеток микроорганизмов. Особенно он ценен для функционально-морфологического изучения крупных объектов типа дрожжей. Цитоплазма дрожжевых организмов (при условии яркого источника света и хорошего апохроматического иммерсионного объектива) слабо и равномерно опалесцирует. На ее фоне четко различаются черные оптически пустые вакуоли. Капли жира выделяются как сильно блестящие гранулы. Протопласт погибающих клеток опалесцирует молочно-белым цветом.

4.3.4.2 Фазово-контрастная микроскопия

Человеческий глаз выявляет только различия в длине (цвете) и амплитуде (интенсивности, контрастности) световой волны, но не улавливает различий в фазе.

Почти все живые клетки прозрачны, так как световые лучи, проходя через живую клетку, не меняют своей амплитуды, хотя и изменяются по фазе.

Превратить фазовый (неконтрастный) препарат в «амплитудный» (контрастный) можно, либо окрашивая объект (для живых клеток этот прием малопригоден), либо снижая апертуру конденсора путем прикрывания диафрагмы (прием также нежелателен, так как снижается разрешающая способность микроскопа).

Метод фазово-контрастной микроскопии, предложенный голландским физиком Цернике для наблюдения за прозрачными объектами, основан на преобразовании фазовых изменений, претерпеваемых световой волной при прохождении через объект, в видимые амплитудные с помощью специального оптического устройства. Если в объектив обычного микроскопа вмонтировать специальный диск – фазовую пластинку с кольцом, а в конденсор – кольцевую диафрагму (непроницаемую для лучей света пластинку, в которой имеется прозрачная щель в виде кольца), так чтобы через конденсор и объектив проходило лишь кольцо света, которое затем совмещается с кольцом фазовой пластинки объектива, то фазы проходящего светового луча сдвигаются и можно наблюдать эффект фазового контраста.

Для проведения исследований необходимо в дополнение к световому микроскопу иметь фазово-контрастное устройство (в настоящее время наиболее широко применяются модели КФ-1 или КФ-4), которое состоит из фазовых объективов, конденсоров с набором кольцевых диафрагм и вспомогательного микроскопа (оптического устройства, помещаемого в тубус вместо окуляра при установке фазового контраста).

Метод применяют для исследования живых клеток микроорганизмов, контрастность которых достигается оптическим путем без вмешательства в физиологические процессы изучаемых объектов.

4.3.4.3 Люминесцентная микроскопия

Основана на явлении фотолюминесценции. Люминесценция (от lumen – свет) – свечение веществ, возникающее после воздействия на них каких-либо источников энергии: света, электронных лучей, ионизирующего излучения. Фотолюминесценция – люминесценция объекта под влиянием света. Некоторые биологические объекты способны при освещении коротковолновыми лучами (сине-фиолетовыми, ультрафиолетовыми) поглощать их и испускать лучи с более длинной волной (светиться желто-зеленым или оранжевым светом). Это так называемая собственная (первичная) люминесценция, которая наблюдается без предварительного окрашивания объекта. Вторичная (наведенная) люминесценциявозникаетпосле окраски препаратов специальными люминесцирующими красителями – флюорохромами (акридином желтым, акридином оранжевым, аурамином, примулином, конго красным, тетрациклином, хинином). Препараты, окрашенные флюорохромами, изучают в средах, не люминесцирующих под действием коротковолновых лучей, — в воде, глицерине, вазелиновом масле или физиологическом растворе.

Преимущества люминесцентной микроскопии по сравнению с обычными методами заключаются:

— в сочетании цветного изображения и контрастности объектов;

— возможности изучения морфологии живых и убитых клеток микроорганизмов в питательных средах и тканях животных и растений;

— исследовании клеточных микроструктур, избирательно поглощающих различные флюорохромы, которые являются при этом как бы специфическими цитохимическими индикаторами;

— изучении функционально-морфологических изменений клеток;

— использовании флюорохромов при иммунологических реакциях и подсчете бактерий в образцах с невысоким их содержанием.

Для люминесцентной микроскопии готовят на предметных стеклах препараты-мазки или нативные препараты, которые окрашивают специальными флюоресцентными красителями. При работе с иммерсионным объективом используют нефлюоресцирующее масло.

4.3.4.4 Электронная микроскопия

Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа (0,2 мкм). Электронный микроскоп применяется для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других субмикроскопических объектов. Высокая разрешающая способность электронного микроскопа, практически составляющая от 0,1 до 0,2 нм, позволяет получать общее полезное увеличение до 1000000 раз.

Устройство электронного микроскопа в принципе аналогично светооптическому микроскопу, но роль световых лучей в электронном микроскопе играет пучок электронов, излучаемых специальным источником – электронной пушкой. Электроны попадают в магнитную конденсорную линзу. Использовать стеклянные линзы или зеркала для фокусировки электронов нельзя, так как стекло непроницаемо для электронов. В электронном микроскопе роль линз выполняет круговое магнитное поле, под действием которого электроны могут отклоняться или центрироваться. Функция конденсорной линзы электронного микроскопа аналогична выполняемой конденсором обычного микроскопа – сведение пучка электронов в одной точке на объекте. Пройдя через объект, электроны попадают в объектную линзу, которая вновь фокусирует расходящийся пучок и дает первое промежуточное изображение объекта. Магнитный проектор (проекционная линза, аналогичная по функции линзе окуляра) дает окончательное увеличение изображения объекта на флюоресцирующем экране – металлической пластинке, покрытой тонким слоем сернистого цинка или минерала виллемита. При попадании на экран электронных лучей каждая частица этого слоя начинает светиться; замещая экран фотографической пластинкой, изображение объекта можно сфотографировать.

На сегодняшний день электронные микроскопы бывают трех видов: трансмиссионные (просвечивающие), сканирующие и электронные микроскопы высокого напряжения. В последних большое ускорение электронов позволяет им проходить через сравнительно толстые срезы (1…5 мкм), при этом получают трехмерное изображение структур, что облегчает изучение объекта. Сканирующие электронные микроскопы обеспечивают рельефное изображение поверхности объекта. Разрешающая поверхность этих приборов значительно ниже, чем у электронных микроскопов «просвечивающего типа».

Препараты для электронно-микроскопических исследований помещают на специальные сетки, на которые нанесена тончайшая целлюлозная или пластмассовая пленка — подложка. Для увеличения контрастности объекта проводят его напыление тяжелыми металлами (хромом, золотом, палладием) в виде паров или проводят обработку контрастирующими веществами (фосфорно-вольфрамовая кислота).

Читайте также:  Что пить при пониженном давлении - какие лекарства и народные средства принимать в домашних условиях

Контрольные вопросы

1. Какие правила необходимо соблюдать при работе в микробиологической лаборатории?

2. Как устроена микробиологическая лаборатория?

3. Каково основное оборудование и для каких целей его используют в микробиологической лаборатории?

4. Перечислите основные инструменты и посуду, применяемые в микробиологической лаборатории. В чем их назначение?

5. Какие виды световых микроскопов вы знаете, для чего они предназначены?

6. Из каких частей состоит световой микроскоп?

7. Что относят к механической части микроскопа?

8. Каково назначение макро- и микрометрического винтов? Как ими пользоваться?

9. В чем особенности оптической системы микроскопа, из каких частей она состоит?

10. Что такое сухие и иммерсионные объективы?

11. Как регулировать степень освещенности препарата?

12. Почему с одной стороны зеркало плоское, а с другой вогнутое? Когда и каким зеркалом пользуются?

13. Какое строение имеет окуляр, и в чем его назначение?

14. Что означают понятия «увеличительная способность микроскопа» и «разрешающая способность микроскопа», и как их можно определить?

15. Перечислите основные правила работы с биологическим микроскопом.

16. Каков порядок работы при микроскопии препаратов с сухим объективом?

17. Перечислите правила и порядок работы с иммерсионным
объективом.

18. Какие методы микроскопии вы знаете, в чем их особенности?

19. На чем основан метод фазово-контрастной микроскопии?

20. Из чего состоит фазово-контрастное устройство?

21. Что означают термины «люминесценция», «флюорохромы»? Какие виды люминесценции вы знаете?

22. В чем достоинства люминесцентного метода микроскопии?

23. Какое явление лежит в основе метода темнопольной микроскопии? С какой целью используется этот метод?

24. В чем особенности устройства электронного микроскопа и принцип его работы?

ЛИТЕРАТУРА

1. Асонов, Н.Р. Практикум по микробиологии / Н.Р. Ассонов. – М.: Агропромиздат, 1988. – 155 с.

2. Борисов, Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии / Л.Б. Борисов [и др.]. – М.: Медицина, 1984. – 256 с.

3. Градова, Н.Б. Лабораторный практикум по общей микробиологии / Н.Б. Градова [и др.]. – М.: ДеЛи принт, 2001. – 131 с.

4. Лерина, И.В. Лабораторные работы по микробиологии / И.В. Лерина, А.И. Педенко. – М.: Экономика, 1986. – 158 с.

5. Мармузова, Л.В. Основы микробиологии, санитарии и гигиены в пищевой промышленности. – М.: ПрофОбрИздат, 2001. – 136 с.

6. Нетрусов А.И. Практикум по микробиологии / А.И. Нетрусов [и др.]. – М.: Академия, 2005. – 608 с.

7. Прозоркина, Н.В. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии / Н.В. Прозоркина, Л.А. Рубашкина. – Ростов н/Д.: Феникс, 2002. – 416 с.

8. Теппер, Е.З. Практикум по микробиологии / Е.З. Теппер, В.К. Шильникова, Г.И. Переверзева. – М.: Дрофа, 2004. – 256 с.

9. Трушина, Т.П. Микробиология, гигиена и санитария в торговле / Т.П. Трушина. – Ростов н/Д.: Феникс, 2000. – 320 с.

10. Шлегель, Г. Общая микробиология / Г. Шлегель. – М.: Мир, 1987. – 567 с.

Методы микроскопического исследования микроорганизмов

Светлопольная микроскопия

Светлопольная микроскопия осуществляется с помощью обычного светового микроскопа, основной частью которого является объектив. На оправе объективов обозначается увеличение: 8, 10, 20, 40, 90.

При исследовании микробов применяется иммерсионная система (объектив). Иммерсионный объектив погружают в каплю кедрового масла, нанесенного на препарат. Кедровое масло имеет такой же коэффициент преломления, как и стекло, и этим достигается наименьшее рассеивание световых лучей (рис. 1.12).

Изображение, получаемое в объективе, увеличивает окуляр, состоящий из двух линз. В отечественных микроскопах применяются окуляры с увеличением 7, 10, 15 (рис. 1.13). Общее увеличение микроскопа определяется произведением увеличения объектива на увеличение окуляра. В микробиологии обычно используются увеличения в 900-1000 раз. Качество микроскопа зависит не от степени увеличения, а от его разрешающей способности.

Темнопольная микроскопия

Микроскопия в темном поле зрения основана на следующем принципе (рис. 1.14). Лучи освещают объект не снизу, а сбоку и не попадают в глаза наблюдателя: поле зрения остается темным, а объект на его фоне оказывается светящимся. Это достигается с помощью специального конденсора (параболоид) или обычного конденсора, прикрытого в центре кружком черной бумаги.

Препараты для темнопольной микроскопии готовят по типу «висячей» и «раздавленной» капли. При приготовлении препарата «раздавленная» капля исследуемый материал (бактериальную культуру в физиологическом растворе) наносят на предметное стекло, которое покрывают покровным стеклом. Капля материала заполняет все пространство между покровным и предметным стеклом, образуя ровный слой. Для приготовления «висячей» капли необходимо использовать специальные предметные стекла с углублением в центре и покровные стекла.

На середину покровного стекла наносят исследуемый материал. Края углубления на предметном стекле смазывают вазелином, и им накрывают покровное стекло так, чтобы капля находилась против центра углубления. Затем переворачивают препарат покровным стеклом вверх. Темнопольная микроскопия используется для изучения живых неокрашенных микроорганизмов.

Фазово-контрастная микроскопия

Фазово-контрастный конденсор представляет собой обычный объектив с револьвером и набором кольцевых диафрагм для каждого объектива. Фазовый объектив снабжен фазовой пластинкой, которую получают нанесением солей редкоземельных элементов на объектив. Изображение кольцевой диафрагмы совпадает с кольцом фазовой пластинки соответствующего объектива.

Фазово-контрастная микроскопия значительно повышает контрастность объекта и используется для изучения нативных препаратов.

Люминесцентная микроскопия

Люминесцентная микроскопия основана на способности некоторых веществ под влиянием падающего на них света испускать лучи с другой (обычно большей) длиной волны (флюоресцировать). Такие вещества называют флюорохромами (акридиновый желтый, родамин и др.). Объект, обработанный флюорохромом, при освещении ультрафиолетовыми лучами приобретает яркий цвет в темном поле зрения.

Основной частью люминесцентного микроскопа является осветитель, имеющий лампу ультрафиолетового цвета и систему фильтров к нему (рис. 1.16). Очень важно использование нефлуоресцентного иммерсионного масла.
Люминесцентная микроскопия в практической микробиологии используется для индикации и идентификации возбудителей инфекционных заболеваний.

Электронная микроскопия

Возможности оптических микроскопов ограничены слишком большой длиной волны видимого света (6000 А). Объекты, размеры которых меньше этой величины, находятся за пределами разрешающей способности светового микроскопа. В электронном микроскопе вместо световых волн используются электронные лучи, обладающие чрезвычайно малой длиной волны и высокой разрешающей способностью (рис. 1.17).

В качестве источника электронных лучей применяют электронную пушку, основой которой служит вольфрамовая нить, нагретая электрическим током. Между вольфрамовой нитью и анодом на пути электронов находится электрическое поле высокого напряжения. Электронный поток вызывает свечение фосфоресцирующего экрана. Проходя через объект, части которого имеют различную толщину, электроны будут соответственно задерживаться, что проявится на экране участками затемнения. Объект приобретает контрастность.

Читайте также:  ЦИКЛОФЕРОН раствор — инструкция и цена в аптеках Украины, аналоги и показания Компания фармаркетинг

Препараты для электронной микроскопии готовят на тончайших коллоидных пленках, исследуют объекты после их высушивания («нативные препараты»), напыления при помощи тяжелых металлов, ультратонких срезов метода реплик и др.

С помощью электронной микроскопии можно обнаружить самые мелкие структуры, получить увеличение до 200 000 и увидеть объекты размером 0,002 мкм.

МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ — способы изучения микроскопического строения различных объектов, размеры которых находятся за пределами разрешающей способности глаза. Микроскопические методы исследования играют важную роль в бактериологических, вирусологических, цитологических, гематологических, гистологических и других исследованиях; их применяют также в фармакологии, химии, минералогии, кристаллографии и др. Среди Микроскопических методов исследования наряду с обычной световой микроскопией широко используют стереоскопическую, темнопольную, интерференционную, фазово-контрастную, поляризационную, ультрафиолетовую, электронную микроскопию и др.

Основой для развития Микроскопических методов исследования явились работы Аббе (Е. К. Abbe) но дифракционным свойствам электромагнитного излучения. С помощью теории Аббе определяют разрешающую способность микроскопов и изготавливают линзы, лишенные хроматической и сферической аберрации, объективы, дифракционные решетки, осветительный и рисовальный аппараты.

Дифракционная решетка Аббе служит для изучения явлений дифракции и состоит из системы тонких прозрачных и непрозрачных чередующихся линий, к-рые прорезают специальным резцом в толще металлического покрытия, нанесенного на стеклянную подложку.

Осветительный аппарат Аббе применяют в микроскопах для освещения объекта в проходящем свете. Он состоит из зеркала (плоского или вогнутого) и конденсора, посредством к-рых поток света направляют в плоскость объекта в виде сходящегося пучка лучей, что обеспечивает более высокую освещенность препарата и улучшает разрешающую способность микроскопа. Конденсор состоит, как правило, из двух-трех линз; ближнюю к объективу линзу устанавливают так, чтобы ее плоская поверхность была параллельна плоскости предметного столика микроскопа. При удалении конденсора от плоскости объекта яркость освещения снижается, однако возрастает контрастность изображения.

Рисовальный аппарат Аббе служит для зарисовки с гистол, препаратов. Он состоит из расположенной над окуляром микроскопа системы стеклянных призм, к-рая направляет в глаз исследователя световые лучи, прошедшие через гистол, препарат и отраженные с помощью зеркала от листа бумаги, лежащей возле микроскопа. Благодаря этому наблюдатель видит совмещенное изображение препарата и своей руки, очерчивающей, напр., карандашом контуры деталей гистол, картины препарата.

При пользовании М. м. и. важное значение приобретает правильная установка освещения, к-рую обычно проводят по методу Келера. Для этого автономный осветитель, напр. ОИ-19, располагают так, чтобы плоскость ирисовой диафрагмы осветителя находилась на расстоянии 15—25 см от центра зеркала микроскопа. Затем через закрытую на 1/2—1/3 диафрагму проецируют изображение нити лампы накаливания осветителя в центр зеркала микроскопа, прикрытого для облегчения наблюдения листом белой бумаги. Изменяя расстояние между микроскопом и осветителем, производят фокусировку изображения нити накаливания и затем зеркалом микроскопа направляют изображение в его объектив. При этом величина освещенного пятна должна совпадать с диаметром апертурной диафрагмы микроскопа, резкое изображение к-рой можно получить, изменяя положение конденсора и плоскости зеркала. В заключение раскрывают апертурную диафрагму микроскопа и с помощью макро- и микровинтов микроскопа получают яркое и четкое изображение объекта.

При работе с малыми увеличениями микроскопа этот способ не всегда позволяет получить полное и равномерное освещение поля зрения. В этих случаях снимают или отводят в сторону фронтальную линзу конденсора, применяют конденсор с большим фокусным расстоянием. При широко открытой апертурной диафрагме микроскопа изображение бывает недостаточно контрастным. В процессе диафрагмирования увеличивается контрастность изображения и возрастает глубина резкости, но может снизиться разрешающая способность микроскопа за счет нарастающих при этом дифракционных явлений. При смене объектива изображение следует снова сфокусировать в фокальной плоскости при закрытой диафрагме осветителя. В случае отклонения оси осветителя от оси объектива микроскопа края изображения могут быть освещены неодинаково. Чтобы освещенность краев изображения стала одинаковой и равномерной по всей площади поля зрения, наблюдая изображение через окуляр, перемещают осветитель.

Установку освещения по методу Келера применяют также при изучении препаратов в так наз. темном поле. В этом случае заменяют обычный конденсор темнопольным и, наблюдая в окуляр, медленно поднимают конденсор до возникновения темнопольного изображения.

Объекты, изучаемые под микроскопом, могут быть прозрачными, а также непрозрачными, т. е. изменяющими амплитудные и фазовые свойства направленного на них электромагнитного излучения. В зависимости от свойств объекта изменяются физ. свойства света — цвет (длина волны), яркость (амплитуда волны), фаза, плоскость и направление распространения волны, что используют в М. м. и. Для микроскопического исследования окрашенных объектов применяют световой микроскоп. Цвет изображения и различия в окраске нередко позволяют судить о хим. природе отдельных структур изучаемого объекта, но не дают возможности оценить его жизнедеятельность (движение, хемотаксис, слияние и др.), т.к. при окраске часто используют хим. или температурную фиксацию, убивающую биол, объект, но обеспечивающую эффективное окрашивание. В отличие от исследования фиксированных биол, объектов, витальная микроскопия основана на прижизненном окрашивании, в результате к-рого многие структуры живой клетки мало изменяются под действием специальных красителей. Витальная микроскопия может проводиться и без окрашивания, если в обычный световой микроскоп ввести темнопольный конденсор.

Самостоятельным вариантом темнопольной микроскопии (см.) является ультрамикроскопия, при к-рой мельчайшие частицы изучаемого объекта освещают боковым пучком света и на темном фоне они выглядят в виде точек. С помощью ультрамикроскопа (см.) удается измерять частицы и определять нек-рые свойства изучаемых объектов.

Для фазово-контрастной и амплитудно-контрастной микроскопии применяют микроскопы, в к-рых луч света подвергается дифракции в зависимости от особенностей изучаемого объекта; при этом изменяется длина и фаза волны света. Живые микроскопические объекты в световом микроскопе выглядят прозрачными и почти не изменяют амплитуды и цвета светового луча и вызывают лишь сдвиг фазы его волны. Лучи света, прошедшие через изучаемый объект, отклоняются от вложенной в объектив специальной полупрозрачной фазовой пластинки, и, т. о., между лучами фона и объекта возникает разность длины волны. Если эта разность достигает 1/4 длины волны, то возникает заметный для глаза эффект, когда темный объект отчетливо виден на светлом фоне или, наоборот, в зависимости от структуры фазовой пластинки (см. Фазово-контрастная микроскопия). Пластинки, изменяющие только яркость и цвет фона, используют в амплитудно-контрастном или аноптральном микроскопе. Амплитудно-контрастное устройство может быть установлено также на биол, микроскоп. Эти микроскопы значительно расширяют возможности прижизненного исследования биол, объектов без предварительной фиксации и окраски препарата.

Интерференционная микроскопия построена примерно на тех же принципах, что и фазово-контрастная, но, в отличие от нее, дает возможность получать количественные данные. С помощью интерференционного микроскопа можно измерять разность фаз, вызываемую различными клеточными структурами, и определять их массу. Последовательные измерения разности фаз в двух средах с известными показателями преломления дают возможность одновременно определять толщину объекта, концентрацию сухого вещества, содержание воды и позволяют косвенным образом судить о клеточном метаболизме, проницаемости мембран, активности ферментов. Интерференционная микроскопия находит применение в цитол, исследованиях, используется для количественного анализа клеточных структур живых объектов, напр, культур тканей, простейших и т. п.

Читайте также:  Зуд, жжение, покалывания в заднем проходе - в чем причина и что это может быть Здоровье прежде всего

Поляризационная микроскопия основана на различном преломлении структурными компонентами клеток и тканей поляризованного света. В одних из них свет распространяется с одинаковой скоростью независимо от плоскости поляризации (изотропные структуры), в других — скорость распространения поляризованного света зависит от направления его по продольной или поперечной оси объекта (анизотропные структуры). Ряд биол, объектов (миофибриллы, мерцательные реснички и др.) имеет строгую молекулярную ориентацию, является анизотропным и обладает двойным лучепреломлением. Поляризованный свет формируют при помощи специальных поляризаторов — пленчатых поляроидов или призм Николля, к-рые помещают в микроскопе между источником света и изучаемым объектом. Образованный ими пучок плоскополяризованного света разлагается на два луча, поляризованных во взаимно перпендикулярных плоскостях. Один из этих лучей проходит через анизотропные структуры объекта, запаздывая относительно другого. При выходе из объекта оба луча оказываются в разных фазах. Когда показатель преломления вдоль структуры больше, чем в поперечном направлении, говорят о положительном двойном лучепреломлении, при обратных отношениях — об отрицательном двойном лучепреломлении. Структуры клетки, образованные ориентированными белковыми молекулами, обладают собственным положительным двойным лучепреломлением. Характер лучепреломления поляризованного света, величина анизотропии в сочетании с изменением этих оптических показателей после экстракции жирорастворителями позволяют судить о молекулярной организации структуры. Напр., в результате исследований миелиновых оболочек нервов с помощью поляризационного микроскопа было обнаружено радиальное по отношению к продольной оси нерва расположение молекул липоидных веществ и перпендикулярное по отношению к ним расположение макромолекул белка. Сходное расположение белково-липоидных элементов обнаруживается в эритроцитах и хлоропластах. С помощью поляризационного микроскопа в гаверсовых системах трубчатых костей обнаружены пластины с продольной и циркулярной ориентацией фибрилл. Кроме того, по характеру двойного лучепреломления изучают форму вирусов, белковых макромолекул и т. п.

В поляризованном свете можно исследовать как окрашенные, так и неокрашенные тканевые срезы, приготовленные на замораживающем микротоме или залитые в парафин. В частности, липиды и миелин исследуют на замороженных срезах, тогда как исследование поперечнополосатой мышечной ткани и кристаллов можно производить как в парафиновых, так и замороженных срезах. Двойное лучепреломление коллагена, отчетливо проявляющееся в таких средах, как капрат целлюлозы или смолы, может полностью утрачиваться в препаратах, заключенных в смесь глицерин-желатин.

В научных и практических исследованиях широко применяют люминесцентную микроскопию (см.), для к-рой используют ультрафиолетовые лучи или сине-фиолетовую часть спектра. Нек-рые внутриклеточные образования, напр, липиды, обладают собственной (первичной) люминесценцией (см.). Другие компоненты клетки могут люминесцировать после предварительной окраски так наз. флюорохромами (см.).

Ультрафиолетовая микроскопия используется в цитол, и гистохимических исследованиях. Она позволяет изучать локализацию, количественное распределение в клетках и тканях высокомолекулярных соединений (белки, нуклеиновые кислоты) и наблюдать за их динамикой в процессе жизнедеятельности. Этот метод дает возможность без предварительной фиксации и окраски препаратов рассматривать исследуемый материал, напр., с целью прижизненного изучения микрообъектов.

Ультрафиолетовая абсорбционная микроскопия основана на способности нек-рых веществ, входящих в состав тканей и клеток, прозрачных в видимом свете, поглощать ультрафиолетовые лучи с определенной длиной волны.

При исследовании живых или фиксированных неокрашенных объектов возрастает контрастность изображения за счет избирательного поглощения ультрафиолетовых лучей высокомолекулярными соединениями. В частности, важное значение ультрафиолетовая микроскопия имеет для изучения распределения в клетке нуклеиновых к-т, поглощающих ультрафиолетовое излучение в участке спектра ок. 260 нм. Поглощение ультрафиолетового излучения белками зависит от входящих в их состав ароматических аминокислот (тирозина, триптофана, фенилаланина), дающих максимум поглощения в участке спектра ок. 280 нм. Для получения наглядного представления о распределении в препарате веществ изучаемый участок фотографируют в ультрафиолетовом свете с разной длиной волн. В последующем фотоснимки переснимают на цветную пленку в хромоскопе, в к-ром перед снимком, сделанным в коротковолновых лучах, помещают синий светофильтр, в лучах средней длины — зеленый и в длинноволновых лучах — красный светофильтр. Эти снимки с помощью специального приспособления совмещают на экране, и изображение становится видимым, передавая условными цветами различия поглощения ультрафиолетовых лучей отдельными структурами клетки.

Ультрафиолетовую флюоресцентную микроскопию, как и абсорбционную, используют для цитохимического изучения живых или фиксированных неокрашенных объектов, в связи с тем что спектры ультрафиолетовой флюоресценции веществ отличаются друг от друга.

Инфракрасная микроскопия дает возможность установить структуру объекта по характеру поглощения света с длиной волн 800—1000 нм. Широкое распространение имеет исследование в инфракрасном свете веществ, частично или полностью непрозрачных в ультрафиолетовой и видимой областях спектра. Для инфракрасной микроскопии биол, объекты не подвергают дополнительной хим. обработке. При помощи инфракрасного микроскопа производят исследование импрегнированной нервной ткани и капилляров в гистол, срезах, распознают повреждения сетчатки и радужной оболочки глаза.

Стереоскопическая микроскопия позволяет исследовать непрозрачные объекты и создает эффект объемного изображения. Ее применяют, напр., для исследования секционного, операционного и биопсийного материала, для проведения работ с помощью метода макромикроскопии (см.). В судебной медицине стереоскопическую микроскопию используют для изучения органов и тканей трупа, а также для исследования различных вещественных доказательств (см.).

Для повышения разрешающей способности М. м. и. создают оптические системы, основанные на электромагнитных линзах с применением в качестве источника излучения потока электронов, напр, для электронной микроскопии (см.) используют пучок быстрых электронов, а роль линз выполняют электрические и магнитные поля определенной конфигурации. Разновидностью электронной микроскопии является сканирующая (растровая) микроскопия, к-рая дает возможность получить объемное изображение объекта за счет излучаемых им вторичных электронов.

В нек-рых микроскопах плавное, бесступенчатое увеличение без смены объектива позволяет в пределах широкого диапазона установить интересующие детали объекта, напр, динамику биол, процессов, происходящих в тканевых культурах.

Библиография:

Биофизические методы исследования, под ред. Ф. Юбера, пер. с англ., М., 1956; Де Робертис Э., Новинский В. и Саус Ф. Биология клетки, пер. с англ., с. 94, М., 1973; Дитчберн Р. Физическая оптика, пер. с англ., М., 1965; Ильин P. С., Федотов Г. И. и Федин Л. А. Лабораторные оптические приборы, М., 19 66, библиогр.; Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия, пер. с англ., с. 7, М., 1969; Скворцов Г. Е. и др. Микроскопы, Л., 1969, библиогр.

Н. К. Пермяков, Г. М. Могилевский.

Ссылка на основную публикацию
Телмиста 40мг делить по 20мг Посоветуйте другой препарат из сартанов — Вопрос кардиологу — 03 Онлайн
Вальсакор® (80 мг) Инструкция русский қазақша Торговое название Международное непатентованное название Таблетки, покрытые пленочной оболочкой 80 мг, 160 мг Одна...
Татьяна Денисова ℹ️ биография, личная жизнь, семья, фото со свадьбы с Александром Кривошапко, дети х
Кто попал в команды Мигеля, Татьяны Денисовой и Егора Дружинина В эти выходные в шоу «Танцы» на ТНТ прошел финальный...
Тахикардия — ПроМедицина Уфа
Особенности тахикардии у мужчин Сегодня тахикардия является довольно распространенным заболеванием у мужской половины населения. Главным признаком такой разновидности аритмии считается...
Тело говорит надо меньше на себя брать
Шея: психосоматика Шея — одна из важнейших частей человеческого тела. На уровне физическом шея есть соединение головы и туловища, а...
Adblock detector